Antecedentes: las proteoliposomas de muy pequeño tamaño (VSSP) tienen un efecto adyuvante sobre la respuesta humoral y celular, la activación de células dendríticas y la diferenciación de epitopes T Helper. Objetivos: estudiar la capacidad estimulante de la respuesta inmune humoral de las VSSP cuando estas se utilizan como componente  de una vacuna peptídica basada en GnRH. Métodos: Se utilizaron ratas Copenhagen inmunizadas con 750 ug del péptido mimético de GnRH (GnRHm1-TT) con y sin  VSSP. Las mezclas fueron emulsionadas en adyuvante oleoso Montanide ISA 51. Los inmunógenos se administraron en un esquema quincenal y en un total de cuatro dosis por vía subcutánea. Resultados: el análisis de la seroconversión anti GnRH reveló que el grupo inmunizado con el péptido GnRHm1-TT + VSSP desarrolló una potente respuesta inmune anti GnRH, que resultó significativamente superior a la alcanzada con el péptido emulsificado solo en Montanide. El análisis post-mortem  de los órganos diana denotó una drástica disminución de su peso y tamaño respecto al grupo control. A su vez, el grupo en el cual se utilizó el VSSP, mostró una diferencia significativa en la reducción de estos órganos diana respecto al grupo solo inmunizado con GnRHm1-TT adyuvado en Montanide, que resultó ser de p=0.023 y p=0.009 en la próstata y los testículos respectivamente. Aunque en el grupo donde se utilizó el VSSP, la reducción de la testosterona fue mayor, esta diferencia no fue estadísticamente significativa (P=0,06). Conclusiones: las VSSP son muy útiles como inmunopotenciadoras y por esta razón deben considerarse su empleo en vacunas peptídicas con poca capacidad inmunogénica.

Palabras clave: proteoliposoma, vacuna, cáncer de próstata

ABSTRACT

Backgrounds: Very Small Size Proteoliposome (VSSP) are a complex of very small size proteoliposomes that includes proteins, lipids, CpG and gangliosides tumor-associated that constitute a potential target for cancer immunotherapy. Objective: this work deals with the stimulating capacity of the VSSP to reach a humoral response when they are used as a component in a peptidic vaccine based on the gonadotrophin releasing hormone (GnRH). Methods: this study was carried out in male Copenhagen rats, which were immunized with 750 µg of the GnRH mimetic peptide (GnRHm1-TT) with or without the VSSP. The mixtures were always emulsified with the oil adjuvant Montanide ISA 51. Results: the anti GnRH seroconversion analysis revealed that the group immunized with the peptide GnRHm1-TT /VSSP developed a strong anti GnRH seroconversion. This antibody levels, proved to be significant superior to those reached by the use of the GnRHm1-TT peptide solely emulsified in Montanide. Postmortem analysis on the Testosterone ablation target organs (prostate and testicles), yielded a sudden decrease in their size and weight in respect to the control group. On the other hand, the group submitted to the use of GnRHm1-TT /VSSP, showed a significant difference in the reduction of these target organs in comparison with the group only immunized with GnRHm1-TT adjuvated in Montanide ISA 51. These values turning to be of P=0.023 and P=0.009 in the prostate and testicles respectively. Conclusions: these findings foreground the VSSP as a useful immunopotentiator to be used as part of a GnRH based vaccine to treat prostate cancer.

Key words: proteoliposome, vaccine, prostate cancer

Antecedentes: El Sistema de Gestión de la Calidad del Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín maneja un gran volumen de documentación, una parte de esta, debe distribuirse a los departamentos o áreas de la institución para que los trabajadores conozcan las normas relacionadas con su trabajo. Objetivos: facilitar el acceso a la documentación del Sistema de Gestión de la Calidad del Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín. Métodos: Se empleó el paquete Qt SDK, un servidor de bases de datos MySQL y el cliente HeidiSQL para diseñar un sistema de gestión en línea de la documentación sobre calidad de la institución. Resultados: Se elaboró un sistema cliente – servidor que permite colocar en una base de datos cada uno de los documentos con vistas a facilitar el acceso a estos por parte de los usuarios del sistema. Los usuarios pueden acceder al sistema desde cualquier sitio de la red local para consultar la información que requieren. Conclusiones: el sistema desarrollado posibilita un ahorro considerable de hojas y material de oficina, porque las copias de los documentos que antes se distribuían de forma impresa a los trabajadores, ahora se encuentran disponibles en la red local en formato digital y pueden ser consultadas en el momento que se necesiten. También se agiliza y facilita el trabajo de distribución y actualización de la documentación, porque para derogar un documento basta solo con sustituir la copia anterior por la nueva y automáticamente, este se encontrará disponible para sus usuarios, con ello se evita la necesidad de destruir físicamente la documentación obsoleta.

Palabras clave: cliente-servidor, Qt4, documentación, gestión de la calidad.

Antecedentes: el estudio de los componentes bioactivos y las propiedades inmunofarmacológicas de un extracto hidrosoluble crudo, obtenido por decocción del micelio de Pleurotus spp es importante para determinar su actividad inmunofarmacológica en el tratamiento potencial de la leucemia humana.

Objetivos: determinar los componentes macromoleculares y fotoquímicos mayoritarios y evaluar la actividad inmunofarmacológica in vitro del extracto sobre la vía alternativa del complemento y la actividad citotóxica sobre células leucémicas humanas NB4. Métodos: obtención y evaluación de la actividad inmunofarmacológica in vitro. Resultados: se destaca la presencia mayoritaria de carbohidratos y proteínas, el 70,4% y el 15,0% respectivamente. El tamizaje fotoquímico evidenció la presencia de flavonoides, taninos y fenoles. El análisis espectroscópico y fotoquímico, demostró la existencia de estructuras tipo β-D-glucano, así como de metabolitos con actividad inmunomoduladora como flavonoides, taninos y fenoles. El cultivo sumergido permite la obtención de biopreparados inmunocéuticos de Pleurotus spp. Conclusiones: el extracto micelial ejerció acciones inmunofarmacológicas in vitro, mediante la activación dependiente de la concentración y del tiempo de incubación de la vía alternativa del complemento y un efecto antitumoral dependiente del ciclo celular sobre células leucémicas humanas NB4, relacionado con la inducción de apoptosis.

Palabras clave: inmunomoduladora, bioactivos, inmunofarmacológicas, apoptosis

ABSTRACT

Backgrounds: the study of bioactive components and the pharmacological properties of a hydrosoluble extract obtained from the decoction of Pleurotus spp. mycelium was developed in this work. Objectives: to determine the major macromolecular components and phytochemicals and evaluate the in vitro inmunopharmacological activity of the extract on the alternative pathway of complement and cytotoxic activity on human leukemia NB4 cells. Methods: Data collection and inmunopharmachological activity in vitro. Results: a prevalence of carbohydrates and protein (70.4% and 15.0%) was observed. The phytochemical and spectroscopic analysis demonstrated the existence of such structures β-D-glucan and the presence of metabolites with immunomodulating activity as flavonoids, tannins and phenols. The extract exerted in vitro inmunopharmachological actions, through the activation, depending on the concentration and time of incubation of the alternative complement pathway, and an antitumor effect on cell cycle dependent NB4 human leukemia cell, related to the induction of apoptosis. Conclusions: the submerged culture allowed in obtaining biopreparations of Pleurotus spp. The phytochemical screening showed the presence of flavonoids, tannins and phenols. Spectroscopic analysis showed the existence of β-type structures D-glucan. The mycelial extract actions exerted in vitro by the concentration-dependent activation and incubation time of the alternative complement pathway and an antitumor effect on cell cycle dependent NB4 human leukemia cell, related to the induction of apoptosis.

Key words: immunomodulating, bioactive, immunopharmacological, apoptosis

Antecedentes: la toxoplasmosis tiene una amplia distribución mundial y es más frecuente en zonas húmedas, de temperatura intermedia y cálida, por lo que su prevalencia es mayor en los países tropicales y subtropicales del continente americano. La infección por Toxoplasma gondii en niños puede ser congénita o adquirida. Objetivos: determinar la seroprevalencia de la toxoplasmosis en niños de edad preescolar en el municipio Jobabo de la provincia Las Tunas. Métodos: se empleó la inmunofluorescencia indirecta para determinar la presencia de anticuerpos IgGh anti-Toxoplasma gondii. De un universo de 569 muestras de sueros proveniente de la población  infantil  del municipio, se seleccionaron 200 muestras de suero (103 del sexo masculino y 97 del sexo femenino) en pacientes de 3 a 6 años de edad. El tipo de muestreo fue no probabilístico, con criterios de selección aleatoria. Resultados: los resultados de esta investigación demostraron que esta enfermedad fue frecuente en niños con edades comprendidas entre tres y seis años de edad y la elevada seroprevalencia encontrada en este grupo de edad se debe a las condiciones epidemiológicas pues población estudiada fue de la procedencia rural. Se obtuvo el 40,5% de seroprevalencia de anticuerpos anti-Toxoplasma gondii en una muestra de estudio de 200 niños aparentemente sanos, resultados semejantes a los encontrados en las poblaciones adultas. Conclusiones: no se demostró la existencia de diferencias significativas en relación con el sexo, sin embargo, se apreció una mayor tendencia de positividad para el sexo masculino en este grupo de edad estudiado.

Palabras clave: seroprevalencia, toxoplasmosis, niños en edad preescolar, Toxoplasma gondii

ABSTRACT

Backgrounds: toxoplasmosis is considered once of the most parasite spread worldwide .It is most frequently in damp regions. The prevalence of this illness is high in tropical or subtropical country in America Continent .The infection by Toxoplasma gondii in children can be congenital or acquired. Objectives: to determine the seroprevalence in children of pre-school age in Jobabo, Las Tunas province. Methods: Indirect Immunoflorescense Technique was applied. Results: two thousand sample of serum was analyzed in children of pre-school age in Jobabo, Las Tunas province. The seroprevalence anti –Toxoplasma gondii of  40.5% was determined. Eighty one positive samples were obtained. Inside of these, positive samples 45 were males and 36  females. Conclusions: there were not  considerable differences regarding the sex, although  a high incidence for positive results in males was observed.

Key words: seroprevalence, toxoplasmosis, children in pre-school age, Toxoplasma gondii

Antecedentes: el diagnóstico del estado de la función de liberación de lotes realizado entre 2009 y 2011 en el Departamento  de Aseguramiento de la Calidad del Centro de Inmunología y Biopreparados del Holguín mostró la necesidad de crear un registro para lograr la trazabilidad de todos los productos que se emplean en el proceso productivo. Objetivos: diseñar un registro para la verificación y el control de reactivos, materias primas, material de envase y productos finales. Métodos: se revisaron los expedientes maestros de los diferentes productos del CIBHO y los procedimientos que rigen la función de liberación de lotes. Resultados: el registro diseñado recoge aspectos como son: número de lotes, códigos de recepción y de referencia, tiempo de vencimiento de los productos, lotes donde se emplearán los las materias primas, reactivos, materiales de envase, así como requerimientos de la producción planificada y existencia de los insumos que esta exige. El diseño del registro responde a lo establecido en la NC ISO 9001: 2008, referente a los acápites de planificación de la realización del producto, su identificación,  trazabilidad, seguimiento y medición. Conclusiones: el registro obtenido permitirá la mejora continua de la función de liberación de lotes y por consiguiente de la labor del Sistema de Gestión de la Calidad, al establecer una relación directa entre la producción planificada, su logística y las determinaciones realizadas por los especialistas en liberación de lotes.

Palabras clave: registro, liberación de lotes, mejora continua, verificación y control

ABSTRACT

Backgrounds:  the diagnosis of the state of the releasing of lots in the Department of Assurance of the Quality of the Center of Immunology and Biological Product  of Holguin (in the period from January of 2009 to December of 2011) showed the need of creating a record of products used in the process. Objectives: the designed record for verification and control of reagents, raw materials, packaging material and finished products made for the purpose of this work. Methods: the Register picked designed aspects of batch numbers, codes and reference desk, product expiration time, which will be used in batch production and the plan and actual, on the basis of the quantity on hand which is to such products. Results: this registration will continuously improve the lot release function and therefore System Quality Management, as it achieved a direct relationship between what was planned for production logistics and reconciled by the specialist in lot release. Conclusions: the record obtained allow continuous improvement of the lot release function and therefore the work of System Quality Management, to establish a direct link between the planned production, logistics and determinations made by specialists lot release.

Key words: record, lot release, continuous improvement, monitoring and control

Antecedentes: Para realizar el llenado de tintura de propóleos en el Centro de Inmunología y Biopreparados se necesita una tecnología de presión con pistola dispensadora como en el proceso tecnológico para el llenado de Trofin-Vital. Sin embargo, la institución no posee esta tecnología y no puede desarrollarla ante la carencia de los materiales necesarios Objetivos: diseñar un nuevo sistema de llenado por acción de vacío que permita desarrollar un flujo continuo de llenado en un tiempo prudencial, con un mínimo de derrame y por tanto de pérdidas del producto. Métodos: el diseño se realizó con instrumentos de bajo costo, existentes en la institución como son: bomba de vacío, capilar de acero inoxidable, botellones de 20 litros de cristal, frasco trampa de 2 litros de cristal, mangueras y tapones de silicona. Resultados: El nuevo sistema posibilita el llenado de un lote conformado por 1 000 frascos de 60 ml en un tiempo de 1.15 h con cero por ciento de derrame y 100% de rendimiento. Se han producido  25 000 frascos de tintura de propóleos con este sistema. Conclusiones: El nuevo sistema de llenado sustituye la técnica estándar establecida y posibilita realizar el proceso de manera eficiente.   

Palabras clave: tintura de propóleos, tecnología de vacío

ABSTRACT

Backgrounds: to make the filling of propolis tincture at the Center for Immunology and Biological Products pressure technology is needed with dispensing gun like in the technological process for trofin vital filling.  in the absence of this technology and can not develop because of the shortage of materials. Objectives: to design a new vacuum filling system that would make a filling continuous flow of in a reasonable length of time, with minimal spillage avoiding product losses. Methods: the design was performed using low-cost instruments, existing in the center: vacuum pump, stainless steel capillary, 20 liter bottles glass, trap glass flask of 2 liters, hoses and silicone stoppers. Results: this system allowed the filling of 1 lot consisting of 1000 bottles of 60 ml in a record time of 1.15 h with a zero per cent spillage and 100% yield. Conclusions: The new filling system replaces the standard technique and allows to developing the process efficiently.

Key words: propolis tincture, vacuum technology

Antecedentes: el control de la calidad es el conjunto de actividades dirigidas a asegurar que la calidad de los productos o los servicios se comporte según las exigencias establecidas para su elaboración o suministro. Objetivos: realizar ensayos microbiológicos en jarabes obtenidos en el Centro de Producción de Medicina Verde de Holguín. Métodos: se emplearon procedimientos establecidos para determinar el límite microbiano de los productos estudiados. Resultados: de 221 lotes de jarabes provenientes del Centro de Producción de Medicina Verde, 182 lotes, el 82,4% cumplieron los límites establecidos; además, se identificaron los microorganismos oportunistas. Conclusiones: se requiere mejorar las prácticas de producción farmacéuticas con la finalidad de incrementar la calidad del producto. Para esto, se recomienda la aplicación de una estrategia de capacitación en buenas prácticas en la institución.

Palabras clave: buenas prácticas de producción farmacéuticas, ensayos microbiológicos.

ABSTRACT

Backgrounds: the quality control is the set of activities to ensure that the quality of the products or services is maintained in accordance with the requirements to achieve an increase in labor productivity. Objectives: microbiological testing of syrups obtained in the Herbal Medicine Production Center was the purpose of this paper. Methods: a procedure to determine the microbiological limit was used. Results: microbiological tests were conducted of 221 batches of syrups from the Herbal Medicine Production Center. 182 lots were determined compliant and 39 non-compliant which represented 82.4% compliance, in addition to identify opportunistic microorganisms. Conclusions: The results of this investigation allowed proposing a strategy for training in pharmaceutical good manufacturing practices in order to increase compliance of the product.

Key words: pharmaceutical good manufacturing practices, microbiological tests

Antecedentes: La sangre bovina es la materia prima que aporta el principio activo del Trofin-Vital, el hierro hemínico, con un periodo de vigencia de 2 meses según especificación del sistema de gestión de calidad. Su composición química varía en función de factores como la raza, edad, estado fisiológico, alimentación, y otros. Sin embargo, la composición media es: 80% agua, 18% proteínas y 2% de hidratos de carbono, lípidos y sales minerales. Objetivos: estudiar la estabilidad, tiempo de conservación y periodo de utilización de la sangre en determinadas condiciones de envase y almacenamiento. Métodos: se emplearon 8 muestras, dos cada vez, con el volumen real utilizado en el proceso productivo, a los 0, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5 y 7 meses de extraída la sangre, y se evaluaron sus características organolépticas, hemoglobina, hematocrito, presencia de hemoparásitos, serología de Brucella y prueba de esterilidad. Resultados: la sangre conservó sus propiedades por un periodo de 6.5 meses, fecha a partir de la cual se observaron indicios de hemólisis y comenzaron a deteriorarse los parámetros de hemoglobina y hematocrito. Conclusiones: se propone un periodo de hasta 6 meses como periodo de uso de la sangre bovina, almacenada a temperatura de entre 2 y 4 ⁰ C. 

Palabras clave: sangre bovina, periodo de utilización.

ABSTRACT

Principio del formulario

Backgrounds: The bovine blood is the raw material that provides the active principle of Trofin-Vital, heme iron, with a term of two months as specified by the quality management system. Its chemical composition varies depending on factors such as race, age, physiological status, power, and others. However, the average composition: 80% water, 18% protein and 2% of carbohydrates, lipids and minerals.

 Objectives: To study the stability, shelf life and period of use of blood in certain packaging and storage conditions. Methods: 8 samples were used, two at a time, with the actual amount used in the production process, at 0, 3, 3.5, 4​​, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5 and 7 months of drawn blood, and evaluated their organoleptic characteristics, hemoglobin, hematocrit, presence of blood parasites, and Brucella serology test for sterility. Results: Blood retained its properties for a period of 6.5 months, the date from which there was evidence of hemolysis and began to deteriorate parameters such as hemoglobin and hematocrit. Conclusions: We propose a period of up to 6 months, period of use of bovine blood stored at temperatures between 2 and 4 ºC.

Key words: bovine blood, use period.

Antecedentes: el producto Trofin-Vital, elaborado por el Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín, es resultado de una transferencia tecnológica del Centro Nacional de Biopreparados, la primera y única realizada en el país para la producción del reconocido antianémico y reconstituyente de origen natural. Objetivos: describir el desarrollo del Proyecto nacional para la generalización del Trofin en Cuba, así como los resultados más relevantes obtenidos por el Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín. Métodos: se examinaron los registros históricos de producción, se analizó su estabilidad y factibilidad, así como, sus tendencias. Resultados: se presentó el escalado productivo desde el 2001 hasta el 2011, se mostraron los avances en cuestión productiva a pesar de mantenerse la misma capacidad de instalación. Se expusieron datos que revelan la generalización del producto y que potenciaron la consolidación de los indicadores de  ciencia e innovación tecnológica. Conclusiones: según los requisitos recogidos en las Normas ISO y las regulaciones vigentes en las Buenas prácticas de producción farmacéuticas emitidas por el Centro de Regulación de los Medicamentos para el otorgamiento de registros y licencias, la transferencia se comporta de manera estable, factible y posee amplias perspectivas para su desarrollo.

Palabras clave: transferencia tecnológica, Trofin-Vital, estabilidad y factibilidad

ABSTRACT

Backgrounds: trofin-vital is the result of technology transfer obtained by the Center for Immunology and Biological Products of Holguin in which, under the guidance of the National Center Biopreparations materialize what has now become the first and only Technology Transfer held in our country for the production of anti-anemic and recognized natural tonic. Objectives: The main objective of this paper is to show the upward trajectory of the National Project for Trofin widespread in Cuba, reflecting the most relevant results Center for Immunology and Biological Products of Holguín. Methods: By analyzing historical process logic, data and trends. Results: the stability, feasibility and prospects for this transfer were demonstrated due to the requirements contained in ISO and regulatory requirements for Pharmaceutical Good Manufacturing Practices issued by the Center on Regulation of Medicines to the granting of registration and licensing. Conclusions: Considering the requirements and regulations  this transference allows wide perpectives, stability, feasibility.

Key words: technology transfer, Trofin-Vital, stability, feasibility

Antecedentes: la sangre bovina estéril se utiliza en la producción de trofin vital,  un suplemento nutritivo y proteico con una escalada productiva desde el año 2000 en el Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín. Objetivos: mostrar el comportamiento de los parámetros críticos de la sangre bovina estéril procesada en la institución en el periodo 2008-2011. Resultados: Entre 2008 y 2011 creció el volumen de materia prima obtenida a la vez que descendió el porcentaje de rechazo a causa del incumplimiento de los estándares de aceptación. Conclusiones: Los resultados obtenidos demuestran una alta preparación técnica de la totalidad del personal involucrado en la gestión de la sangre bovina estéril, su adiestramiento; así como la aplicación de buenas prácticas de producción farmacéutica y el cumplimiento del reglamento de bioseguridad establecido.

Palabras clave: sangre bovina estéril, trofin vital, producción, calidad.

ABSTRACT

Backgrounds: Sterile bovine blood is the raw material used in the production of trofin vital nutritional supplement with scaling and protein production since 2000 at the Center for Immunology and Biological Products in Holguin. Objectives: The behavior of the parameters of this raw material was the goal of this study. Results: The volumes were better from 2008 until 2011 and the reject percentage decreased in the same period of time. Conclusions: The results show a high technical preparation of all personnel involved in the management of sterile bovine blood, their training, and the implementation of best manufacturing practices and the established compliance with pharmaceutical biosafety regulations.

Key words: sterile bovine blood, trofin vital, production, quality

Antecedentes: La gestión de riesgos es útil para planificar y mejorar la seguridad biológica, el control de la calidad y la seguridad y salud del trabajo, si se considera el marco legal vigente en Cuba y la inspección que constituye una parte importante de estos procesos. Objetivos: observar el comportamiento de la gestión del riesgo en el Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín desde entre 2009 y 2012. Métodos: se emplearon los procedimientos normalizados de operación que rigen la actividad de bioseguridad en la entidad. Resultados: se observó una disminución de los riesgos evaluados como moderados en el periodo de estudio y un decrecimiento en el total de riesgos evaluados y en las inconformidades detectadas. Conclusiones: la gestión del riesgo realizada mediante inspecciones de seguridad biológica con el seguimiento de las medidas correctivas ha permitido ambientes de trabajo seguro y ha ubicado a la actividad de bioseguridad en un estadio superior.

Palabras clave: riesgo biológico, inspecciones de seguridad biológica, seguridad y salud del trabajo.

ABSTRACT

Backgrounds: Risk management is helpful in planning and improving biological safety, quality control and safety and health, considering the current legal framework in Cuba and the inspection is an important part of these processes. Objectives: To observe the behavior of risk management at the Center for Immunology and Biopreparations of Holguín between 2009 and 2012. Methods: Standard operating procedures regarding biosecurity activity were used. Results: There was a decrease in the risks assessed as moderate in the study period and a decrease in the total assessed risks and identified nonconformities. Conclusions: managing risk through safety inspections conducted biological monitoring of corrective measures has allowed safe working environments and has placed biosecurity activity in a higher stage.

Key words: biohazard, biological safety supervision, safety and labor health

Antecedentes: el conocimiento actual con respecto a las características del citoma en la ataxia espinocerebelosa tipo 2 es limitado. Sin embargo, otras patologías causadas por expansiones de CAG se han asociado con marcadores morfológicos de daño al ADN, que sugiere un vínculo entre estas mutaciones y procesos de inestabilidad genética. Objetivos: evaluar si ciertos marcadores de inestabilidad genética, citotoxicidad y muerte celular se asocian con el proceso patológico de la ataxia espinocerebelosa tipo 2. Métodos: se realizó un estudio de caso control con 24 individuos afectados y 25 controles, pareados por sexo y edad; se aplicó un test sobre células exfoliadas de la mucosa oral para determinar la frecuencia de células con micronúcleos, cariolisis, picnosis, binucleación  y con cromatina condensada. Resultados: se identificó un incremento significativo de células con micronúcleos en individuos afectados por la ataxia espinocerebelosa tipo 2  (p<0,001); el incremento fue de 44,5% en relación con los controles. La frecuencia de células binucleadas,  cariolíticas, picnóticas y con cromatina condensada no estuvo asociada a la ataxia espinocerebelosa tipo 2. Conclusiones: ninguno de los marcadores de citotoxicidad (binucleación), muerte celular (cromatina condensada, cariolisis y picnosis), ni micronúcleos, mostraron  asociación significativa con el número de repeticiones de CAG en el alelo ATXN2 expandido o con marcadores clínicos; excepto las células BN, que mostraron una asociación significativa con la duración de la enfermedad (r=0,46; p=0,027). Se identificó una asociación entre la ataxia espinocerebelosa tipo 2 y micronúcleos, que indica la ocurrencia de procesos de inestabilidad genética como componente del proceso patológico de esta enfermedad.

Palabras clave: marcadores de citotoxicidad, micronúcleos, ataxia espinocerebelosa tipo 2 (SCA2)

ABSTRACT

Backgrounds: pathogenic CAG expansions are associated with Spinocerebellar ataxia type 2 (SCA2). Little is known about the behavior of the cytome in SCA2. In polyQ pathologies has been found morphological markers of nuclear damage which suggest an association between pathological CAG tracts and genetic instabilities. Objectives: the aim was to evaluate whether genome instability, citotoxicity and cell death markers are associated to the SCA2 pathological process. Methods: In a case-control setting that included 24 affected individuals and 25 age and sex matched controls, a test for micronuclei, binucleated, condensed chromatin, pyknotic and karyolitic cells was applied in exfoliated oral cells. Results: There was a highly significant increase of cells with MNs in SCA2 affected individuals (p<0.001); the increment was 44.5% related to controls. The frequencies of binucleated, karyolytic, pyknotic and condensed chromatin cells were no associated to SCA2. Conclusions: None of the studied cell proliferation or cell death markers, neither micronuclei, showed significant associations with the CAG repeat number at ATXN2 expanded alleles or clinical markers, with the only exception for binucleated cells that showed a significant association with disease duration (r=0.46; p=0.027). It was revealed an association between SCA2 and micronuclei unveiling the occurrence of genome instability as a component of the pathological process.

Key words: SCA2, markers of citotoxicity, micronuclei.

Antecedentes: la enfermedad de Huntington es la enfermedad por poliglutaminas más frecuente a nivel mundial, no obstante se desconoce la frecuencia de la mutación causante de esta enfermedad en los pacientes cubanos afectados con un fenotipo coreico. Objetivos: determinar la frecuencia de expansiones de CAG y la distribución de alelos en el gen HTT en una población cubana. Métodos: se determinó la talla de la expansión de CAG en el gen HTT a 127 miembros de familias con fenotipo coreico y 35 controles no relacionados. Resultados: se observaron 38 clases de alelos HTT en el rango de 12 a 61 repeticiones de CAG. Un total de 61 individuos resultaron portadores de un alelo expandido en el gen HTT. La talla de los alelos mutados osciló entre 39 y 61 repeticiones de CAG y el alelo expandido más común fue el de 45 unidades. Se encontraron alelos de penetrancia completa en el 96% de los portadores de la mutación. En relación con los alelos normales, tanto en familias con la enfermedad como en los individuos controles el alelos normal predominante fue el de 16 repeticiones. Las familias con esta enfermedad presentaron alelos intermedios en el 3,8% de los casos. Conclusiones: Esta constituye la primera caracterización molecular de la mutación de la Enfermedad de Huntington en Cuba. El estudio revela una frecuencia importante de mutaciones causantes de esta condición y un porcentaje importante de expansiones de penetrancia completa, que provee nuevas oportunidades para el manejo de la enfermedad y las pruebas genéticas predictivas.

Palabras clave: corea, enfermedad de Huntington, CAG expansión, alelos intermedios

ABSTRACT

Backgrounds: Huntington's disease is the most frequent polyglutamine disorder at worldwide; nevertheless there are not estimates of the frequency of Huntington's disease (HD) mutation in Cuban subjects affected by choreic phenotypes. Objectives: to assess the frequency of (CAG) n expansions and the allele distribution in the HTT gene in a Cuban population. Methods: One-hundred twenty-seven members of families with choreic phenotypes and 35 unrelated healthy controls underwent molecular analysis to assess the size of (CAG) n tract in the HTT gene. Results: In all, 38 HTT allele classes were observed ranging from 12 to 67 CAG repeats. Sixty-one individuals carried one expanded allele, between 39 to 67 units, whereas the HTT allele carrying 45 repeats was the most common expanded allele. Full-penetrant alleles were observed in 96% of HD mutation carriers. Regarding the unexpanded alleles, the allele containing 16 CAG repetitions was the most frequent in both HD families and control individuals. Additionally, a 3.8% of intermediate alleles significantly associated to affected families were found. Conclusions: This is the first molecular characterization of the HD mutation in Cuba. The study revealed a noteworthy frequency of HD mutations in the studied population with a remarkable percentage of full-penetrant expansions providing new opportunities for disease management and genetic testing.

Key words: chorea, Huntington Disease, CAG expansion, intermediate alleles

Antecedentes: la técnica actual para el aislamaiento de Clostridium spp permite pocos aislamientos productivos de la bacteria ya que la cepa que se aisla puede estar contaminada con otros microorganismos y no permite su clasificación bioquímica extendiéndose su proceso a más de una semana. Objetivos: modificar la técnica estándar de diagnóstico de Clostridium para aumentar la rapidez del aislamiento y la calidad de la cepa aislada. Métodos: se empleó como variación en el esquema de aislamiento, la capacidad de  termoresistencia de este género, se trataron con calor los tubos de medio líquido, recién sembrados, por un período de tres a cinco minutos en agua en ebullición para eliminar contaminantes y lograr un cultivo bacilar puro. Se dejó incubar por 48 h, luego se pasó al medio de agar sangre en campana de anaerobiosis y se incubó por otras 48 h para su aislamiento final  y posterior  clasificación. Resultados: se aislaron 32 cepas del género Clostridium, clasificadas como Clostridium  chauvoei (22), Clostridium novyi (2), Clostridium perfringes (2) y Clostridium spp (7). Estos resultados se validaron en laboratorio de diagnóstico veterinario de Camagüey. Conclusiones: con la variación aplicada a la técnica, se logró aislar la bacteria en cuatro días  con una reducción de la cantidad de medio de cultivo empleado y un alto nivel de pureza de la cepa; que facilitó su clasificación bioquímica y redujo el riesgo biológico para el personal técnico.

Palabras clave: clostridium, anaerobios, endosporas.

ABSTRACT

Backgrounds: current technique for Clostridium spp isolation allows productive few isolates of bacterium since this isolated strain may be contaminated with other microorganisms and prevents biochemical classification process extending it over one week. Objectives: to modify the isolation technique for a rapid diagnosis of Clostridium spp. Methods: using as variation in the isolation outline the capacity of term resistance of this gender, trying with heat the means tubes liquidates of completed Tioglicolato of sowing for one period three to five minutes in water in boil it stops this way to eliminate the pollutants and to achieve a cultivation pure bacillary, allowing them to incubate for 48 hours stops then to pass it to the means of agar it bleeds in anaerobiosis bell and incubating them for other 48 hours for their isolation final and later classification. Results: 32 strains were isolated from the genus Clostridium, classified as Clostridium chauvoei (22), Clostridium novyi (2), Clostridium perfringens (2) and Clostridium spp (7). These results were validated in veterinary diagnostic laboratory of Camagüey. Conclusions: with the variation applied to the technique, the bacterium was isolated in four days with a reduced amount of culture medium used, and a high level of purity of the strain, which facilitated its biochemistry and biological classification which reduced risk for technical staff.

Key words: clostridium, aerobes, endospore

Antecedentes: la enfermedad de Machado-Joseph (MJD/SCA3) es un padecimiento neurodegenerativo hereditario, causado por una expansión de la repetición del CAG en el gen ATXN3, es la ataxia espinocerebelosa  de mayor prevalencia en el mundo, pero  hasta el momento no se había diagnosticado ningún caso en Cuba. Objetivos: evaluar la frecuencia de MJD/SCA3 entre las familias cubanas con ataxias autosómicas dominantes diferentes a la ataxia espinocerebelar tipo 2, e identificar las principales características moleculares en los individuos afectados. Métodos: se estudiaron 255 individuos con un diagnóstico clínico de ataxia autosómica dominante diferente a la ataxia espinocerebelar tipo 2; se realizó análisis molecular con el objetivo de determinar el tamaño del CAG en el gen ATXN3. Resultados: se identificaron 14 individuos pertenecientes a siete familias  no relacionadas, que son portadores de un alelo ATXN3 expandido. Los alelos normales presentan entre 13 a 37 repeticiones de CAG, mientras que los expandidos entre 63 a 77 repeticiones. La edad de inicio muestra una media de 39,7±9,18 y correlaciona significativamente con el número de repeticiones de CAG de los alelos expandidos. Conclusiones: La baja prevalencia de MJD/SCA3 junto a su baja frecuencia entre el grupo de ataxias autosómicas dominantes diferentes a la ataxia espinocerebelosa 2  facilita la caracterización acerca del comportamiento de esta clase de enfermedades en la población cubana. Se inicia así el diagnóstico molecular para otras ataxias espinocerebelares en el país, y se establecen las bases para la implementación del diagnóstico predictivo en familiares con riesgo.

Palabras clave: ataxias espinocerebelosas, ataxia espinocerebelosa 3, expansión de CAG.

ABSTRACT

Backgrounds: Machado-Joseph disease (MJD/SCA3) is an inherited neurodegenerative disease due to the expansion of CAG repeats in the ATXN3 gene. It is the most prevalent spinocerebellar ataxia worldwide, but so far no cases had been diagnosed in Cuba. Objectives: the aim was to assess the frequency of MJD/SCA3 among Cuban families with autosomal dominant ataxia different from SCA2 and to identify the main molecular features of affected individuals. Methods: in a nationwide genetic survey for SCAs, 95 patients with a clinical diagnosis of autosomal dominant ataxia different from SCA2 were recruited. All subjects underwent molecular analysis to assess the (CAG)n expansion size in the ATXN3 gene. Results: fourteen (15%) out 95 patients belonging to 7 unrelated families carried an expanded ATXN3 allele. National prevalence rate was estimated near to 0.39/100 000 inhabitants. Normal allele size ranged from 13 to 37 CAG repeats, whereas the expanded alleles ranged from 63 to 77 CAG repeats. No significant differences in both the size of the paternally versus maternally inherited expanded alleles or between affected males and females were observed. Age at onset showed a mean of 39.7±9.18 and correlated significantly with the CAG repeat number at expanded alleles. Conclusions: the low prevalence rates of MJD/SCA3 together with its low frequency among the group of no-SCA2 autosomal dominant ataxias are new clues about the ethnic particularities of Cuban population. Through our work the molecular diagnosis of no-SCA2 ataxias started in the country, at the same time the basis for the beginning of predictive diagnosis testing in families at risk were established.

Key words: spinocerebelar ataxia, spinocerebellar ataxia 3, CAG expansion

Antecedentes: El propóleo es una sustancia resinosa de origen vegetal con acción bactericida, bacteriostática, fungicida y antibiótica. En el Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín se emplea como materia prima para la producción de la solución alcohólica al 15%. Objetivos: introducir un nuevo renglón de uso farmacéutico en la cartera de productos del la entidad: la tintura de propóleos al 5%. Métodos: se modificó el proceso tecnológico basado en el método de extracción alcohólica de Pichansky, que consiste en tres extracciones alcohólicas sucesivas, con filtraciones intermedias en condiciones de temperatura controlada y pasos de separación de las ceras contaminantes, estandarización, llenado, etiquetado y embalaje del producto final. Resultados: se diseñaron los procedimientos normalizados de operación y se elaboraron tres lotes experimentales que se evaluaron según las especificaciones de calidad referidas en el Formulario Nacional  2010. Los procesos de inspección y ensayo, mejora continua y retroalimentación con los clientes, garantizaron el desarrollo de un producto de excelencia que actualmente se comercializa a través de la red de farmacias pertenecientes a la empresa Farmox. Conclusiones: Encuestas realizadas por esta institución, reflejaron que las propiedades antiparasitarias constituyeron la acción farmacológica de mayor impacto social.          

Palabras clave: propóleos, extracción alcohólica, acción antiparasitaria.

ABSTRACT

Backgrounds: Propolis is a resinous substance of vegetable origin with bactericidal, bacteriostatic, fungicidal and antibiotic actions. In the institution is used as raw material for the production of the 15 % alcoholic solution. Objectives: the objective of this research is the introduction of a new line of pharmaceutical product in CIBHO’s productions: the 5% propolis tinctures. Methods: Technological proposed process is based on a modification of Pichansky´s alcoholic extraction method, there consists of three alcoholic successive extractions, with intermediates temperature controlled conditions filtrations processes and steps of separation of pollutants waxes, standardization, filling, labeled and packing of the final product. Results: The operation procedures were designed and a creative work session was carried out employing work group methods to determine the possible trade name and product´s label, taken account legal documents referred to industrial property and denominative marks OCPI registered. Finally, three experimental lots were prepared and they were evaluated according to quality specifications recounted in the National Form 2010. Both inspection and assaying processes, as well as continuous improvement and customer feedback guaranteed an excellence product that is commercialized through the network of pharmacies belonging to the Farmox Company. Conclusions: Questionnaires realized by the last one, reflected that the antiparasitic properties constituted the pharmacological action of major social impact.

Key words: propolis, alcoholic extraction, antiparasitic action

Antecedentes: el Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín está orientado a la producción y comercialización de reconstituyentes de origen natural. Su producto líder es el Trofin-Vital, que se comercializa en el país en tres presentaciones: Trofin natural, Trofin saborizado y Trofin en tabletas. Actualmente, se encuentra en proceso de aprobación un proyecto de inversión para la ampliación de la capacidad productiva y la modernización del equipamiento tecnológico para su producción. Objetivos: evaluar posibles estrategias de producción según la aceptación de las tres presentaciones diferentes de Trofin, y la posibilidad de la aparición de variables no controlables como el surgimiento de otros productos similares en el mercado. Métodos: la predicción de la probabilidad de ocurrencia de estados de la naturaleza de alta o baja aceptación, se realizó estimando el comportamiento de la comercialización del producto en los últimos 10 años. Se estimaron además, los valores de utilidad potenciales para cada presentación del Trofin adoptada como posible estrategia de producción y con esto se elaboró la matriz de decisión final. La información fue procesada en el paquete estadístico WinQSB versión 2.0 para Windows. Resultados: el software mostró siete resultados de criterios de decisión en condiciones de riesgo e incertidumbre, seis de ellos se inclinaron hacia la selección de la estrategia de producción de Trofin saborizado. Conclusiones: la producción del Trofin saborizado es la estrategia de producción de mayor factibilidad, tanto en condiciones de riesgo como de incertidumbre, para la obtención de mayor nivel de utilidades y el cumplimiento de la responsabilidad social del Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín.

Palabras clave: Trofin saborizado, Centro de Inmunología y Biopreparados de Holguín, estrategia de producción

ABSTRACT

Backgrounds: The Immunology and Bioproducts Center of Holguín mission is the production and commercialization of natural origin supplements. Its leader product is the Trofin Vital, which is commercialized in the country in three presentations: Natural Trofin, Flavored Trofin and Trofin in Tablets. At present is in process of approval a project of investment for the enlargement of the productive capacity and the modernization of the technological equipment. Objectives: In this work there were evaluated three possible courses of action to continue for the administration, taken into account states of the nature of high or low acceptance, determined also, for the appearance of variables not controllable as the emerging of other competitive products on the market. Methods: predicting the probability of occurrence of states of nature high or low acceptance was made by estimating the behavior of marketing the product in the last 10 years. The potential utility values were also estimated ​​for each presentation of Trofin adopted as possible and production strategy developed with this final decision matrix. The information was processed using the statistical package version 2.0 for Windows WinQSB. Results: The results showed seven software criteria decision under risk and uncertainty, six of them were inclined towards selecting production strategy Trofin flavored. Conclusions:  Flavored Trofin production strategy is the most viable production, both in terms of risk and uncertainty, to obtain higher levels of profits and fulfillment of social responsibility of Immunology Biopreparations Center of Holguín.

Key words: flavored Trofin, Immunology and Biopreparation Center of Holguín, production strategy

Antecedentes: las emulsiones agua en aceite son de los sistemas de liberación de antígenos más efectivos para generar una respuesta de anticuerpos alta y prolongada hacia antígenos vacunales después de una inmunización simple. Objetivos: evaluar las características de la proporción agua/aceite en un rango desde 60/40 hasta 40/60 (p/p) y la fuerza de mezclado (rpm) para determinar la capacidad inmunopotenciadora de las emulsiones agua en aceite y la seguridad de los animales. Métodos: Las emulsiones agua en aceite formuladas, se evaluaron en yeguas inmunizadas para medir la magnitud de la formación de anticuerpos in vivo y las reacciones locales. Se aplicó una inmunización de dosis única y se evaluó la respuesta inmune de anticuerpos. Resultados: El alto contenido de aceite mineral mostró ser el más efectivo en la formación de la respuesta de anticuerpos, las partículas formadas por fuerzas de mezclado bajas produjeron una mayor respuesta de anticuerpos. Los  títulos de anticuerpos antitoxina fueron seguidos por 12 semanas, durante este periodo los niveles de anticuerpos se mantuvieron como una meseta de la respuesta inmune en la cinética de producción de anticuerpos. Conclusiones: Las partículas de mayor tamaño provocaron una respuesta inmune superior. El sistema adyuvante utilizado pudiera ser una alternativa para la inmunización en las preparaciones de antitoxinas tetánica si se considera su capacidad inmunopotenciadora y seguridad en los animales.

Palabras clave: emulsiones agua en aceite, adyuvante, vacuna, respuesta de anticuerpos.

ABSTRACT

Backgrounds: water in oil emulsions are systems more effective release of antigen to generate an antibody response to high and prolonged vaccine antigens after a single immunization. Objectives: To evaluate the characteristics of the water / oil in a range from 60/40 to 40/60 (w / w) and mixed force (rpm) to determine the immunopotentiating capacity of water in oil emulsions and safety animals. Methods: The water in oil emulsions formulated, immunized mares were evaluated to measure the magnitude of antibody formation in vivo and local reactions. We applied a single dose immunization and immune response was evaluated antibodies. Results: The high content of mineral oil was shown to be more effective in the formation of the antibody response, the particles formed by low mixing forces produced a greater antibody response. Antitoxin antibody titers were followed for 12 weeks, during which time antibody levels were maintained as a plateau immune response kinetics in the production of antibodies. Conclusions: The larger particles resulted in a superior immune response. The adjuvant system used could be an alternative for immunization in tetanus antitoxin preparations considering its immunopotentiating capacity and safety in animals.

Keywords: water in oil emulsions, adjuvant vaccine antibody response.

Antecedentes: el diagnóstico molecular de la ataxia espinocerebelosa tipo 2 se   estableció en el Centro para la Investigación y la Rehabilitación de las Ataxias Hereditarias desde 2001, según protocolos estandarizados. Sin embargo, la práctica diaria muestra la necesidad de modificar algunos aspectos técnicos para mejorar el procedimiento del diagnóstico de esta enfermedad. Objetivos: evaluar la efectividad del método convencional en el diagnóstico molecular de los pacientes cubanos con ataxia espinocerebelosa tipo 2  y proponer  una  estrategia para el diagnóstico molecular de las familias con este padecimiento, que tienen un alelo expandido que no amplifica por el método convencional que utiliza los cebadores UH13/UH10. Métodos: el ADN se aisló de acuerdo con los protocolos estandarizados. La reacción en cadena de la polimerasa para detectar la mutación en el gen ATXN2 se realizó con el empleo de las parejas de cebadores SCA2A/SCA2B y DAN1/UH10, previamente publicados y sus posibles combinaciones. Resultados: se detectaron nuevos casos con diagnóstico positivo, que previamente habían sido identificados como no portadores de la mutación (falsos negativos), mediante el uso de los cebadores UH13/UH10. Se propuso entonces, una nueva estrategia de diagnóstico molecular con nuevas combinaciones de cebadores. Conclusiones. el uso de las combinaciones de cebadores SCA2A/SCA2B, UH13/SCA2B y UH13/Hurade-h permite el diagnostico molecular certero de la SCA2 en la población cubana al reducir significativamente el porcentaje de falsos negativos y por tanto mejora la calidad del programa de diagnostico prenatal y presintomático, así como el desarrollo de investigaciones en el campo de la biología molecular.

Palabras clave: ataxia espinocerebelosa tipo 2, expansión de CAG, diagnóstico molecular, pruebas genéticas.

ABSTRACT

Backgrounds: molecular diagnosis for SCA2 was established at Investigation and Rehabilitation Center of Ataxia in Holguín since 2001, according to standardized protocols. However, daily practice showed a necessity to modify some technical aspects to improve efficacy in SCA2 diagnostic procedures. Objectives: the objective was to evaluate the effectiveness of the conventional methods for molecular diagnosis of SCA2 Cuban patients and to propose a strategy of molecular diagnosis for SCA2 families with expanded allele drop out to conventional methods. Methods: the study was carried out in 840 subjects with clinical diagnosis of SCA2.  DNA was extracted according to standard protocols. Polymerase chain reaction (PCR) for the detection of the SCA2 mutation was carried out using UH13/UH10, SCA2A/SCA2B in every possible combination and with other primers in the necessary cases. Results: cases with negative result were now detected and a new strategy was proposed according the best primer arrangement. PCR amplification with UH13/UH10 primers pair could render false negative results by expanded allele drop out at molecular diagnosis for SCA2 in Cuban population. Conclusions: the use of SCA2A/SCA2B, UH13/SCA2B and UH13/Hurade-h primers pairs allows to make a correct molecular diagnosis for SCA2 in Cuban population, as well as, to improve the  quality of the prenatal and presymptomatic program and to develop scientific research in the field of molecular biology.      

Key words: SCA2, CAG expansion, molecular diagnosis, genetic testing

Antecedentes: el tétanos es una enfermedad causada por una neurotoxina producida por el  Clostridium tetani., se controla mediante los programas de vacunación establecidos por la OPS. Los anticuerpos antitoxinas son tradicionalmente producidos en caballos, animales excepcionalmente sensibles a adyuvantes oleosos. También se emplean otros adyuvantes, pero un alto porcentaje de equinos no responden o las antitoxinas que producen son de baja potencia. A escala internacional, durante la producción de anatoxina tetánica se utilizan las antitoxinas obtenidas en equinos, sin embargo, estas no están disponibles para su uso rutinario en Cuba. Objetivos: obtener una antitoxina tetánica similar a las comerciales. Métodos: se utilizaron cuatro grupos de yeguas, se aplicaron diferentes  protocolos de inmunización multisitios con bajas dosis de inmunógenos en pequeños volúmenes adyuvados en emulsión oleosa inmunoestimuladora. La respuesta de anticuerpos se evaluó por la prueba de floculación de Ramón. Resultados: los títulos de antitoxina no variaron significativamente de un protocolo de inmunización a otro, los cuales aumentaron rápidamente y alcanzaron una meseta a las seis semanas para tres grupos de animales y  fueron significativamente superiores en el cuarto grupo, en el que su actividad alcanzó hasta 2000 UeqLf/ ml. Conclusiones: el caballo es un modelo satisfactorio para la obtención de antitoxinas. La concentración de anticuerpos antitoxina tetánica aumenta con el paso del tiempo y la repetición de los estímulos inmunogénicos. Los protocolos de inmunización más prolongados producen mejores resultados de IgT. Los protocolos de inmunización multisitios y  el adyuvante utilizado provocan reacciones adversas menos severas que los adyuvantes de Freund.

Palabras clave: antitoxinas tetánicas, suero hiperinmune, adyuvante oleoso

ABSTRACT

Backgrounds: tetanus is a disease caused by a neurotoxin produced by Clostridium tetani. Its control is a strategy of vaccination programs of the Pan American Health Organization. Antitoxin antibodies are traditionally produced in horses, animals exceptionally sensitive to oil adjuvants. Other adjuvants are used, but a high percentage of horses are non-responders or resulting antitoxins are of low potency. During the production of tetanus toxoid international antitoxin standards obtained in equine are used, however, these are not available for routine use in Cuba. Objectives: the objective of this work is to obtain tetanus antitoxin similar to commercial one. Methods: four groups of mares were used. different multisite immunization protocols with low-dose immunogens in small volumes adjuvanted in an immunostimulating oil emulsion were applied. The antibody response was evaluated by Ramon flocculation test. Results: The antitoxin titers did not varied significantly from an immunization protocol to another, they increased rapidly and reached a plateau at 6 weeks in three groups of animals and were significantly higher in the fourth group, reaching its activity until 2000 UeqLf/mL. Conclusions: the horse turned out to be a successful model for the production of antitoxins. The tetanus antitoxin antibody concentration increases over time and repetition of immunogenic stimuli. Longer Immunization protocols show superior IgT results. Multisite Immunization protocols and adjuvant used cause less severe adverse reactions than Freund's adjuvant.

Key words: tetanus antitoxin, hyperimmune serum, oil adjuvant