Purificación del toxoide pertúsico de Bordetella pertussis
Resumen
Introducción: el toxoide pertúsico es una proteína muy utilizada en las vacunas acelulares contra la tosferina. Desarrollar un protocolo para su purificación con pocos pasos y con parámetros de purificación adecuados, es muy importante para su caracterización química y la valoración de los efectos adversos que puede provocar al inocular principalmente a ratones. Los protocolos de purificación descritos en la literatura científica involucran varios pasos de purificación y bajos rendimientos.
Objetivo: desarrollar un protocolo de purificación del toxoide pertúsico que garantice un grado de pureza alto y un rendimiento de más de 80% a partir de cultivos de un mutante de B. pertussis obtenido en el Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC).
Métodos: para purificar el toxoide se usó una columna de intercambio catiónico Fractogel EMD SO-3 y se eluyó incrementando el pH y la concentración salina por pasos hasta obtener losresultados esperados. La determinación de proteínas totales se realizó mediante el micrométodo linealizado de Bradfor10 usando como patrón albúmina de suero bovina (BSA).
Resultados: se obtuvo 3,28 mg de toxoide por cada litro de cultivo con un rendimiento de 86,7% y un grado de pureza de 96,7%.
Conclusiones: el procedimiento de purificación descrito permite obtener el toxoide pertúsico con un rendimiento mayor que el 80% y alto grado de pureza, lo que garantiza la calidad requerida para su caracterización bioquímica e inmunológica.
Palabras clave: Vacunas acelulares, protocolo de purificación, parámetros de purificación, Bordetella pertussis.
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