Purificación del toxoide pertúsico de Bordetella pertussis

Resumen

Introducción: el toxoide pertúsico es una proteína muy utilizada en las vacunas acelulares contra la tosferina. Desarrollar un protocolo para su purificación con pocos pasos y con parámetros de purificación adecuados, es muy importante para su caracterización química y la valoración de los efectos adversos que puede provocar al inocular  principalmente a ratones. Los protocolos de purificación descritos en la literatura científica involucran varios pasos de purificación y bajos rendimientos.

Objetivo: desarrollar un protocolo de purificación del toxoide pertúsico que garantice un grado de pureza alto y un rendimiento de más de 80%  a partir de cultivos de un mutante de B. pertussis obtenido en el Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC).

Métodos: para purificar el toxoide se usó una columna de intercambio catiónico Fractogel EMD SO^-₃ y se  eluyó incrementando el pH y la concentración salina por pasos hasta obtener los

resultados esperados. La determinación de proteínas totales se realizó mediante el micrométodo linealizado de Bradfor¹⁰ usando como patrón albúmina de suero bovina (BSA).

Resultados: se obtuvo 3,28 mg de toxoide por cada litro de cultivo con un rendimiento de 86,7% y un grado de pureza de 96,7%.

Conclusiones: el procedimiento de purificación descrito permite obtener el toxoide pertúsico con un rendimiento mayor que el 80% y  alto grado de pureza, lo que garantiza la calidad requerida para su caracterización bioquímica e inmunológica.

Palabras clave: Vacunas acelulares, protocolo de purificación, parámetros de purificación, Bordetella pertussis.