Purificación del toxoide pertúsico de Bordetella pertussis

Manuel Hernández Muñoz, Elba Daisy Rivas Rodríguez, Honorio Daniel Llanos Rivas, Manuel Alaín Álvarez Blanco

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Resumen

Introducción: el toxoide pertúsico es una proteína muy utilizada en las vacunas acelulares contra la tosferina. Desarrollar un protocolo para su purificación con pocos pasos y con parámetros de purificación adecuados, es muy importante para su caracterización química y la valoración de los efectos adversos que puede provocar al inocular  principalmente a ratones. Los protocolos de purificación descritos en la literatura científica involucran varios pasos de purificación y bajos rendimientos.

Objetivo: desarrollar un protocolo de purificación del toxoide pertúsico que garantice un grado de pureza alto y un rendimiento de más de 80%  a partir de cultivos de un mutante de B. pertussis obtenido en el Centro Nacional de Investigaciones Científicas (CNIC).

Métodos: para purificar el toxoide se usó una columna de intercambio catiónico Fractogel EMD SO-3 y se  eluyó incrementando el pH y la concentración salina por pasos hasta obtener los

resultados esperados. La determinación de proteínas totales se realizó mediante el micrométodo linealizado de Bradfor10 usando como patrón albúmina de suero bovina (BSA).

Resultados: se obtuvo 3,28 mg de toxoide por cada litro de cultivo con un rendimiento de 86,7% y un grado de pureza de 96,7%.

Conclusiones: el procedimiento de purificación descrito permite obtener el toxoide pertúsico con un rendimiento mayor que el 80% y  alto grado de pureza, lo que garantiza la calidad requerida para su caracterización bioquímica e inmunológica.

 

Palabras clave: Vacunas acelulares, protocolo de purificación, parámetros de purificación, Bordetella pertussis.



Copyright (c) 2021 Manuel Hernández Muñoz, Elba Daisy Rivas Rodríguez, Honorio Daniel Llanos Rivas, Manuel Alaín Álvarez Blanco

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